操作步骤如下:
1.液体石蜡的准备
选用优良化学纯液体石蜡,将液体石蜡分装加塞,用牛皮纸包好,采用以下两种方式进行灭菌:
121℃湿热灭菌30min,置40℃恒温箱中蒸发水分,经无菌检查后备用。
160℃干热灭菌2个小时,冷却后,经无菌检查后备用。
2.斜面培养物的制备
参照定期移植法。
3.灌注石蜡
将无菌的液体石蜡在无菌条件下注入培养好的新鲜斜面培养物上,液面高出斜面顶部1cm左右,使菌体与空气隔绝。
4.保藏
①注入液体石蜡的菌种斜面以直立状态置低温(4~6℃)干燥处保藏,保藏时间2~10年。
②保藏期间应定期检查,如培养基露出液面,应及时补充无菌的液体石蜡。
5.恢复培养
恢复培养时,挑取少量菌体转接在适宜的新鲜培养基上,生长繁殖后,再重新转接一次。